a n i m a l i t r a n s g e n i c i
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A N I M A L I T R A N S G E N I C I. animali in cui sia stata indotta una deliberata modificazione del genoma. ANIMALI TRANSGENICI: campi di applicazione. Studi biologici di base Ricerca medica Tossicologia Biotecnologie Agricoltura e acquacoltura. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
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A N I M A L I T R A N S G E N I C I
animali in cui sia stata indotta una deliberata modificazione del genoma
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ANIMALI TRANSGENICI: campi di applicazione
Studi biologici di base Ricerca medica Tossicologia Biotecnologie Agricoltura e acquacoltura
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Promotore cDNA Sito di splicing
Poli-A
STRUTTURA DI UN COSTRUTTO TRANSGENICO
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PRODUZIONE DI
TOPI TRANSGENICI
PRODUZIONE DI
TOPI TRANSGENICI
Mediante iniezione pronucleare del costrutto
Mediante iniezione pronucleare del costrutto
Mediante ricombinazione
omologa in cellule staminali embrionali
Mediante ricombinazione
omologa in cellule staminali embrionali
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Costrutto transgenico “tradizionale”:
può contenere fino a 5-50 kbp
si integra casualmente in un singolo sito, sotto forma di 1-50 copie (tandem repeats)
importanza del sito di integrazione
variabilità di espressione nelle diverse linee founder
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Yeast Artificial Chromosomes (YACs):
possono contenere fino a diverse centinaia di kbp
espressione più uniforme e prevedibile
relativa importanza del sito di integrazione
scarsa stabilità durante la manipolazione
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Bacterial Artificial Chromosomes (BACs):
possono contenere fino a 100-150 kbp
espressione più uniforme e prevedibile
relativa importanza del sito di integrazione
stabilità durante la manipolazione
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ONCOMOUSE
Mouse Mammary Tumor Virus
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GENE TARGETING
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I II III IV V VI VII VIII IX X
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I II III IV V VI VII VIII IX X XI
Allele wild-type
I II III IV V VIII IX X XIPGK-neo
Allele null KO
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TK
Neo
Targeting vector
Target locus1 2 3
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TK
Neo
1 2 3
Neo
Targeted locus5’ probe 3’ probe
HOMOLOGOUS RECOMBINATION
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TK
Neo
Targeting vector
Target locus1 2 3
1 2 3
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TK
Neo
1 2 3
1 2 3
HOMOLOGOUS RECOMBINATION
Neo1 2 3
Targeted locus
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Neo1 2 3
1 2 3
1 2 3
1 2 3
Espressione di Cre In cellule ES
Screening per individuare cellule che hanno perso Neo ma mantengono gli esoni 1 e 2 e le regioni fiancheggianti loxP
Generazione di topi che presentano i siti loxP in entrambi gli alleli
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